La technique dite de « peptide–spot » est essentiellement utilisée pour l’étude de la structure des protéines ou l’obtention d’anticorps particuliers pour le diagnostic et la recherche humaine ou sur les mammifères. Dans le but de produire de vaccin synthétique, ce travail présente un essai d’adaptation à la mise en évidence, sur la protéine de capside RNA2 du nodavirus, de sites immunogènes pour le loup (Dicentrarchus Labrax). La totalité de la protéine RNA2 de Sb1 et Sb2 est représentée par 109 peptides de 15 acides aminés se recouvrant mais avec un décalage de trois acides aminés à chacun d’eux. Ces peptides sont synthétisés et déposés sur une membrane de cellulose. Les peptides reconnus par les sérums de loup ou de lapin sont révélés par des anti-corps (anti-loup ou anti-lapin) conjugués à l’alcaline phosphatase. La membrane est réutilisée après génération. Il a été testé des sérums de lapin, de géniteurs et d’adultes de loups avant et après injection de nodavirus vivant ou de peptides de synthèse issus de RNA2 incluant soit le N soit le C terminal.Contrairement au lapin, les sérums des loups témoins se fixent aspécifiquement sur à la membrane renforçant la notion de faible spécificité des IgM de poisson.Ces premiers résultats montrent la difficulté d’adaptation au poisson, d’une technique issue des mammifères. Une partie de ces problèmes peuvent être résolus par des modifications techniques (présentation du peptide, utilisation IgM purifié au lieu du sérum...) mais le problème de fond reste que l’immunogénicité d’un épitope dépend de l’espèce.

Spot-Synthesis technique was applied to study protein frame or to develop antibodies with specific characteristics for use in diagnostic or research on human or mammals. In this work this technique was used to find sites on RNA2 protein of Nodavirus which are immunogenic for sea bass (Dicentrarchus labrax). It aimed to achieve synthetic peptide vaccine production against this virus. One hundred and nine overlapping peptides, of 15 amino acids frameshifted by three residues, representing the complete RNA2 protein sequence of Sb1 and Sb2 nodavirus were synthesized on a cellulose membrane by the Spot-Technique. The set of membrane bound peptides was probed by incubation with sea-bass or rabbit serum. Anti sea bass or anti rabbit alkaline phosphatase conjugated antibody revealed the binding. The membrane was further treated so as to remove precipitated dye and bound antibodies and reused when necessary.Serums of rabbit, sea bass bloodstocks and adult (100g) before an after injection with a live Nodavirus were tested. Serum from adult before and after injection of two peptides 15 amino acids including the N terminal for the former and the C terminal for the latter were also tested. In opposition with rabbit, the control fish serum bound aspecifically several peptide and strengthened the idea of low specificity of fish IgM.The first results permit to spot foreseeable difficulty resulting from adaptation of mammal’s technique to fish. Part of them should be resolved by technical adaptation as modification of peptide presentation or use of purified immunoglobulin rather whole serum but they comfirm that the immunogenicity of an epitope depend of the species.