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Préparation d'anticorps monoclonaux spécifiques de l'hémolymphe de la crevette Penaeus japonicus. Recherche par P.C.R. de séquences de type attacine dans l'A.D.N. génomique de Penaeus japonicus
Le développement, à l'échelle mondiale, de structures d'écloseries et d'élevages de pénéides ( P. vannamei, P. monodon, P. japonicus ) s'accompagne de problèmes pathologiques à caractère épidémique d'étiologies variées (virus, bactéries, champignons ). La pérennité et la rentabilité de ces élevages reposent, d'une part, sur la prophylaxie des maladies et d'autre part, sur l'amélioration génétique qui, basée sur des 'critères de résistance aux maladies, nécessite de développer des recherches sur l'immunologie des crevettes. En effet, les connaissances dans ce domaine sont encore limitées chez les crustacés marins comparativement aux insectes. Le présent travail a consisté dans un premier temps à la préparation d'anticorps monoclonaux spécifique!) de l'hémolymphe de· P. japonicus. Parmi 21 Ac Mc qui ont été obtenus, certains constituent des réactifs adaptés à la caractérisation des hémogrammes et à l'étude des fonctions cellulaires. Toutefois, une grande. majorité d'anticorps se révèle spécifique de granulations ou de produits de sécrétion. La deuxième partie de èé travail concerne l'étude de mécanismes de défense humoraux selon une approche de biologie molééulaire. Sur la base de l'hypothèse d'existence d'homologies de séquences nucléotidiques, des gènes de protéines de type attacine, à propriété antibactérienne identifiés et séquencés chez le ver à soie Hyalophora cecropia, ont été recherchés par P.C.R. dans le génome de P. japonicus. Un seul fragment amplifié, d'environ 516 pb, a été obtenu. Les sites de restriction EcoRI et Clal qui ont été inserés dans· les amorces pennettront la vérification de sa nature attacine par clonage, séquençage et comparaison avec les séquences établies chez H. cecropia.
The development of commercial intensive culture of penaeid shrimp, increasingly practised worldwide, has been accompanied by epidemie diseases of infectious etiologies (viruses, bacteria, and fungi ). The profitability and perpetuity of shrimp rearing rely, on one band, on disease profilaxy, : on the other band, on genetic improvment based on resistanqe to disease. For this, the immunology of penaeid constitutes an important area of researches. Compared to insects, investigations involving marine ctustaceans and their immune responses against pathogens ·are relatively limited. First, this work consisted in monoclonal antibody production against P. japonicus hemolymph. Twenty one monoclonal antibod.ies have been produced; some of them are suitable reagents for hemogramm characterization and study of cellular functions. However, most of these antibodies are reactive with bath soluble hemolymph and hemocyte antigenic components. The second part of the work is related to humoral immune mecanisms using a molecular biology strategy. Based on the hypothesis of nuéleotidic sequence homologies, the isolation of attacine-like genes, coding for antibacterial peptides in the giant silkmoth Hyalophora cecropia, bas been attempted in P. japonicus DNA, using the Polymerase Chain Reaction technique. A single amplified fragment of about 516 bp was isolated. Restriction sites 'EcoRI and Clai added to each primer will allow cloning, sequencing and subsequent comparison with H.cecropia attacines.
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Version officielle éditeur | 51 | 8 Mo |