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Préparation et caractérisation de sondes froides d'A.D.N. d'un procaryote de type rickettsien associé à la coquille St Jacques Pecten maximus
Un procaryote de type rickettsien a été récemment décrit chez plusieurs populations de coquilles Saint-Jacques Pecten maximus, pour lesquelles il serait responsable de mortalités. Afin de disposer de méthodes de diagnostic mieux adaptées que l'histologie, la préparation de sondes d'A.D.N. a été entreprise. Les rickettsies sont isolées et purifiées à partir de tissus branchiaux infectés. L'A.D.N . , extrait après digestion des microorganismes par la protèinase K et le lysozyme, a ètè purifié en gradient de CsCl puis digéré par Eco R 1. Les fragments de restriction ont été clonés dans le vecteur Bluescript, les bactéries transformées recombinantes étant aisément identifiées par leurs caractères AmpR Gal-. Le plasmide recombinant pKSRE 34, dont l'insert de 4500 bp peut ètre coupé par Hind III, en générant 4 fragments, a été retenu pour préparer des sondes froides de différentes tailles. Deux types de détection ont été testés: direct ou indirect, correspondant respectivement à un marquage des sondes par la peroxydase ou par sulfonation des résidus cytosine. Leur sensibilité de détection a été estimée à 5 x 104 molecules d'A.D.N. avec une sonde de 4500 bp. Plusieurs sondes ont été séquencées et des amorces oligonucléotidiques préparées "Polymerase Chain Reaction".
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