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Recherche de biomarqueurs de toxicité liés à l'activité estérase non spécifique et à la résistance multixénobiotique chez divers organismes marins
La recherche de biomarqueurs utilisables pour l'évaluation de la qualité du milieu marin a conduit à étudier deux activités cellulaires sensibles à un ensemble complexe de polluants : l'activité estérasique non spécifique et l'activité de résistance multi-xénobiotique. Concernant l'activité estérasique, une méthodologie simple et rapide a été développée en utilisant des mesures de fluorescence consécutives à la désestérification du diacétate de fluorescéine par les micro-algues Calothrix sp. , Haslea ostrearia et Prorocentrum micans. Ces mesures ont été adaptées à la technique utilisant les microplaques pour laquelle les unicellulaires se sont révélé des supports de choix. Ce biomarqueur est très sensible à de nombreux facteurs physiologiques et, parmi les principaux polluants du milieu marin, sensibles aux organophosphorés et, dans une moindre mesure, aux hydrocarbures polyaromatiques insaturés. Concernant l'activité de résistance multi-xénobiotique, la méthode utilisant les mesures de fluorescence liées à la rhodamine B s'est révélée difficilement utilisable avec les micro-algues. Par contre l'utilisation de l'anticorps C219 a permis de caractériser trois protéines de 240, 220 kDa et 170 ~a chez la moule Mytilus edulis, une de 220 kDa chez M. galloprovincialis ainsi que deux de 220 kDa 240 kDa chez l'huître Crassostrea gigas. Un test immunologique permettant l'étude in situ d'échantillons de mollusques a ensuite été développé. Quarante-trois stations parmi les lieux de prélèvement du réseau national d'observation ont fait l'objet d'un tel dosage donnant de nouvelles informations sur la qualité du milieu côtier français.
The atm of this work was to find new non-specifie biomarkers to biomonitor the environmental impact of xénobiotics in marine organisms : the non-specifie esterase activity and the multixenobiotic resistance phenomena (MXR) similar to the multidrug resistance phenomena (MDR). As for the esterase activity, a simple and rapid method based on fluorescent measurements of fluorescein diacetate (FDA) has been developed with unicellular micro-algae : Calothrix sp. , Haslea ostrearia and Prorocentrum micans. This biomarker is very sensitive to many physical and chemical factors such as light intensity, temperature, salinity, stage of growth and, among the main marine pollutants, to organophosphates and, in a lesser extent, to polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH's). Fluorescent measurements using rhodanline B gave results dissimilar to the multidrug resistance phenomena with the algae P. micans. But western blots using the C219 monoclonal anti body allowed the identification of 3 proteins of 240, 220 kDa and 170 kDa in the musset Mytilus edulis, one of 220 kDa in M galloprovincialis and 2 of 220 and 240 kDa in the oyster Crassostrea gigas. In situ assessment of the MXR-transporter (Pgp) expression leve! in these 3 molluscs along the French coast, using the dot-blot technic, allows the identification of polluted sites with high Pgp expression levet. Theses results indicates that such immunochernical measurements could provide new information about environmental pollution.
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